Optimización de la PCR

La PCR es una técnica de gran sensibilidad por lo que hay que tomar precauciones que eviten errores:

• Tener especial cuidado durante los pasos previos a la amplificación: recogida, envío, custodia y procesado de muestras.
• Limpieza exhaustiva y esterilización (lejía, etanol, luz UV, etc) de la superficie de trabajo.
• Cabinas de seguridad biológica para reducir vapores cargados de amplicones de enfermedades.
• Indumentaria adecuada del personal encargado de manipular las muestras y los intrumentos de laboratorio (guantes, bata, pelo recogido, etc)
• Controles positivos y negativos
• Tipado de todo el personal del laboratorio ya que en el caso de encontrar una amplificación no esperada se podrá comprobar si proviene de uno de los operario.

También son importantes las técnicas de diseño de cebadores, aunque estos vienen incluidos en el kit de laboratorio algunos requisitos que deben cumplir son:

• Cebadores con más de 15 nucleótidos para mejorar la especificidad
• No deben diferir en más de 3 bases
• Proporción entre bases púricas y pirimidínicas de 1:1 (40 - 60% máximo) y terminados en 1 o 2 bases púricas
• Evitar regiones con secuencias complementarias entre sí que puedan formar dímeros entre ellas

Elegir la ADN polimerasa y el tampón que más se ajuste a las necesidades