Electroforesis: Interpretación de los resultados de la PCR
La interpretación de los resultados de una PRC se realiza mediante otra técnica llamada ELECTROFORESIS, que puede ser en geles (de agarosa o acrilamida) o capilar.
Electroforesis en gel:
En esta técnica, las moléculas de ADN amplificadas se situan en una superficie en horizontal que contiene un gel que suele ser de agarosa, debido a que son más porosos que los de poliacrilamida y permiten el paso de moleculas de mayor tamaño/peso molecular; pero también se usan los de poliacrilaida cuando las moléculas de ADN son de bajo peso molecular y se estudia la secuenciaciónd e bases de nucleótidos.
A esta matriz en gel se le aplica una diferencia de potencial eléctrico, que genera una fuerza electromotriz que permite el movimiento de las moléculas de ADN desde el cátodo hacia el ánodo a distintas velocidades dependiendo de su peso molecular. La carga eléctrica negativa de las moléculas de ADN dependen de los grupos fosfatos y, el número de estos es proporcional al número de pares de bases, en consecuencia, la movilidad de las moléculas de ADN durante la electroforesis depende de la longitud de las mismas, de forma que, aquellas de menor peso molecular se desplazarán con mayor velocidad entre los poros del gel de agarosa.
Las moléculas moléculas de ADN resultantes de la PCR se tiñen antes de realizar la electroforesis con colorantes como bromuro de etidio o compuestros fluorescentes para hacer visibles las distintas bandas resultantes de la electroforesis y que permitirán la interpretación de los resultados.
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Electroforesis capilar:
En la electroforesis capilar, el proceso electroforético es llevado a cabo en un capilar de silica de unas 50 mm de diámetro. Las moléculas de ADN deben ser marcados fluorescentemente con unas moléculas denominadas fluorocromos que emiten fluorescencia a una determinada longitud de onda cuando son excitados por láser. El equipo en el que se realiza el proceso lleva acoplado un ordenador encargado de traducir los datos de emisiones fluorescentes en secuencias o fragmentos con sus correspondientes alelos asignados. La electroforesis capilar presenta una serie de ventajas frente a los sistemas de electroforesis en geles como son:
Rapidez: debido a que permite el análisis simultáneo de varios loci aunque éstos posean alelos con tamaños solapantes.
Sensibilidad: hace posible detectar cantidades muy pequeñas de ADN amplificado.
Los resultados se obtienen de manera informatizada, lo que facilita el análisis e interpretación de los mismos.
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